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免疫组化操作方法较为简单，但再实际工作中也会遇到一些麻烦。如无特殊性表达或表达较弱、非特异
性着色强、背景深、定位不好、脱片等。引起以上问题的原因较多，主要有组织固定、脱水不良或浸蜡温度过高导致抗原丢失；抗原未修复；抗体或工作液失效、抗体稀释不当；在一定温度下抗体孵育时间不足、一抗和二抗不匹配；显色剂失效或配置方法失误等等。良好的组织固定和脱水及适当的浸蜡温度是做好免疫组化的前提。固定液的PH值对免疫组化结果的影响虽有争议，但中性福尔马林固定有利于正确结果的显示已成为共识。抗原修复能使甲醛固定、石蜡包埋后被遮蔽或变形的组织抗原决定簇明显得到改善，能减少非特异性背景、增强特异性表达强度。组织标本是否需要进行修复处理，应视具体抗体性质及产品说明而定。一般单克隆抗体需要修复，而多克隆抗体大多不要修复，但并不绝对。 |
